在液相色譜中對(duì)組分復(fù)雜的樣品廣泛采用梯度洗脫的方法。梯度洗脫是指在同一個(gè)分析周期中隨著時(shí)間的變化按一定程序梯度性地改變洗脫液的比例(濃度配比、成分、離子強(qiáng)度、溶液極性等)或pH，以期將層析柱上不同的組分洗脫出來(lái)的方法。 

 

在液相色譜中梯度洗脫裝置分兩種：

 

1.高壓梯度：用兩臺(tái)高壓輸液泵將兩種溶劑輸入

2.低壓梯度：在常壓下將兩種溶劑（或多元溶劑）混合，然后用高壓輸液泵將流動(dòng)相輸入到色譜柱中。

梯度洗脫可提高分離度、縮短分離時(shí)間、降低小檢測(cè)量和提高分離精度。

 

梯度洗脫使用時(shí)應(yīng)注意:

 

1、注意各溶劑間的互溶性。

2、對(duì)溶劑的純度要求更高（影響重現(xiàn)性）。

3、注意梯度變化時(shí)系統(tǒng)壓力的變化，防止超出限度。

4、梯度結(jié)束后，用初始流動(dòng)相沖洗，使柱子平衡一段時(shí)間（再生），使系統(tǒng)回復(fù)到初始狀態(tài)。（梯度周期）

5、低壓梯度要注意脫氣，混合后容易產(chǎn)生氣泡。

6、容易出現(xiàn)鬼峰，應(yīng)作空白試驗(yàn)。

7、梯度選擇時(shí)盡量幾相之間相變化要小,否則不易平衡。

8、梯度洗脫應(yīng)使用對(duì)流動(dòng)相組成變化不敏感的選擇性檢測(cè)器（如紫外吸收檢測(cè)器或熒光檢測(cè)器），而不能使用對(duì)流動(dòng)相組成變化敏感的通用型檢測(cè)器（如示差折光檢測(cè)器）。

9、要注意水相中鹽的濃度，防止在有機(jī)相提升過(guò)程中鹽的析出。